如何理解液相色谱(液相色谱图)
对于每一个走过数百根柱子的实验者来说，液相色谱是他们打开未知物质世界的大门。科学研究中的许多问题都可以从色谱图中得到很好的反映。有些问题可以通过改变设备参数来解决，而有些问题必须通过修改操作程序来解决。毕竟，获得良好色谱的关键是正确选择色谱柱和流动相。
在这里，狮子姐姐整理总结了一些大家在实践中可能经常遇到的图集问题。让我们一起来看看他们。
01拖尾峰
1.筛板堵塞:如果色谱柱两端的过滤筛板堵塞，样品会在筛板部分堵塞，造成时间延迟，导致样品在柱后流出时峰形形成尾部。需要反洗色谱柱或更换筛板。
2.柱崩:是指其他原因造成的柱效损失，使柱无法保留物质，使物质不保留在固定相而是随流动相流出，但仍有一点柱效，导致拖尾。需要重新填充或更换色谱柱。
3.有污染:就是样品不是从同一起跑线开始，而是后面从后面跑到终点，呈现拖尾。更换色谱柱或用有机溶剂梯度洗脱1h以上冲洗色谱柱。
4.流动相PH值的错误选择:如果某些样品在一定PH值下，分子型和离子型之间存在动态平衡，离子型向分子型的转化会出现拖尾。调节PH值可以抑制分子解离，改善拖尾。对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于获得对称峰。
02边境峰
1.样品过载:保留的样品在正常峰时间前相继出来，形成一个前峰。减少样本含量。
2.样品溶剂选择不当:当样品溶剂的洗脱能力远强于流动相时，会出现前沿峰，如反相色谱中使用己腈作为样品溶剂时，当流动相的洗脱能力较弱时，会出现前沿峰。选择流动相或接近流动相的比例作为样品溶剂。
3.色谱柱损坏:色谱柱柱效丧失，物质无法保留。更换色谱柱。
4.大峰前面有一个小峰，就是假锋峰，也就是没有分离的小峰埋在大峰前面。调整流动相的洗脱梯度。
03倒峰
1.样品的折射率小:折射率检测器测得的信号就是折射率，反峰的原因是组分的折射率小于流动相的折射率。
2.密度的原因:密度不同，出来的峰也不同。
3.进样:进样过程中，样品瞬间阻断原来的流动相，然后瞬间流动，产生先反后高的“溶剂峰”。
4.基本上不可避免:尽量使用与流动相相同的溶剂作为样品溶解溶剂，取样前注意平衡和冲洗参比池。倒峰基本不可避免，但这个操作会小一些。
04包装
1.色谱柱问题:色谱柱丢失，色谱柱被污染。
2.样品溶解性差:温度可能影响溶解性。
3.流动相不均匀:一般流动相匹配不好，管道流动相不均匀，也会导致上述现象。
基线漂移
1.柱温波动:即使很小的温度变化也会引起基线波动，通常会影响差分探测器、电导率探测器、低灵敏度紫外探测器或其他光电探测器。使用色谱柱烘箱控制色谱柱和流动相的温度，并在检测器前使用热交换器。
2.流动相不均匀:流动相条件变化引起的基线漂移大于温度引起的基线漂移。使用高效液相色谱级溶剂，流动相在使用前脱气。
3.污染或有气体的流动池:用甲醇或其他强极性溶剂清洗流动池。如有必要，使用1N硝酸(不是盐酸)。
4.流量匹配比或流量变化不当:改变匹配比或流量。为避免此问题，请定期检查流动相的成分和流速。
5.样品中有强烈保留的物质:馒头峰样品被洗脱，因此显示基线逐渐上升。使用保护柱，如有必要，在进样之间或分析过程中定期用强溶剂冲洗色谱柱。
06，一个宽阔的山峰出现了。
1.色谱柱污染或故障会导致塔板数减少:更换相同类型的色谱柱。如果新色谱柱可以提供对称的色谱峰，用强溶剂清洗旧色谱柱。
2.色谱柱与检测器之间的管道过长或管道内径过大:更换内径较小的短管道。
3.检测器对反应时间或池体积的响应太大:缩短响应时间或使用较小的流动池。
基线噪音
1.流动相、检测器或泵内有空气体(尖峰):流动相脱气，系统冲洗除去检测器或泵内的空气体。
2.泄漏:检查管接头是否松动，泵是否泄漏，是否有盐沉淀和异常噪音。如有必要，更换泵密封件。
3.流动相混合不完全:用手摇匀或使用低粘度溶剂。
4.温度影响(柱温过高，检测器未加热):使用柱温箱降低温差或增加热交换器。
5.同一条线路上还有其他电子设备(意外噪音):断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自外部，并进行校正。采用精密稳压电源。
08分辨率不够。
1.流动相梯度洗脱设置不合理:优化梯度洗脱程序。
2.流动相污染或变质(导致保留时间改变):重新配置流动相。
3.保护柱或分析柱堵塞:取下保护柱进行分析，必要时更换；如果分析柱堵塞，可以进行反冲洗；如果问题仍然存在，色谱柱可能会被强烈保留的污染物损坏，因此建议使用适当的再生程序。如果问题仍然存在，入口可能被堵塞，更换入口的筛板或更换色谱柱。